Анализ крови на проинсулин

Проинсулин – прогормон, являющийся предшественником инсулина и С-пептида. Он характеризирует состояние бета-клеток поджелудочной железы. Определение проинсулина производится в сочетании с сахаром крови, С-пептидом, инсулином, сульфонилмочевиной, бета-гидроксибутиратом. Исследование концентрации проинсулина назначают для диагностики гипогликемических состояний и инсулинорезистентности, планирования терапевтических мероприятий и проведения оценки эффективности лечения. Для анализа на проинсулин используется сыворотка венозной крови. Наиболее часто для определения прогормона лаборатории применяют иммуноферментный анализ. Уровень проинсулина в крови при таком методе исследования находится в диапазоне от 2 до 6 пмоль/л. Срок исполнения анализа – до 12 рабочих дней.

В бета-клетках поджелудочной железы вырабатываются секреторные гранулы – препроинсулин. Он состоит из комплекса белковых частиц – А, В, С и L-пептидов. От молекулы препроинсулина отделяется L-пептид, образуя неактивную часть проинсулина. Содержание несвязанной неактивной части прогормона небольшое – примерно 1-3% от всего проинсулина в крови. Связанная часть молекулы, состоящая из А, В и C-пептида, является активным проинсулином. Последний с участием конвертаз (РС1/3 и РС2) и карбоксипептидазы Е расщепляется до C-пептида и инсулина (А-пептид и В-пептид). Поскольку период полувыведения проинсулина продолжительнее, чем инсулина, его доля в периферическом кровотоке составляет 10-30% от концентрации инсулина. Прогормон может соединяться с инсулиновыми рецепторами, проявляя 5-10% активности инсулина.

Анализ крови на проинсулин проводят в эндокринологии при определении причины гипогликемических состояний, дифференциальной диагностике сахарного диабета 1 и 2 типов, оценке эффективности лечения инсулинорезистентности. В онкологии исследование проинсулина назначают спустя несколько дней после оперативного лечения неоплазии поджелудочной железы для выявления остатков опухолевых клеток, секретирующих избыток инсулина, и исключения метастазирования.

Показания

Исследование крови на проинсулин назначают пациентам при появлении периодов спутанности сознания, двоения в глазах, необъяснимой слабости, сердцебиения. Такие симптомы часто возникают в ночное время и утренние часы, после длительного периода голодания. Эти состояния могут свидетельствовать о гипогликемии, развивающейся вследствие избыточной секреции проинсулина опухолью из бета-клеток поджелудочной железы. Определение проинсулина показано для дифференциальной диагностики сахарного диабета 1 и 2 типа и контроля успешности лечения инсулинорезистентности при диабете второго типа (через 3 месяца после начала терапии).

Проинсулин в крови назначают рыжеволосым больным с повышенным весом, симптомами диабета, дефицитом кортизола и почечной недостаточностью. Эти проявления могут говорить о наследственном заболевании, связанном с недостатком конвертазы РС1/3 либо семейной гиперпроинсулинемией. В настоящее время анализ на проинсулин всё чаще используется с целью комплексной оценки сердечно-сосудистого риска. Противопоказания к проведению исследования на проинсулин отсутствуют.

Подготовка к анализу и забор материала

Кровь на проинсулин сдают в иммунологической или биохимической лаборатории, обеспеченной соответствующими анализаторами и реактивами. Требуется чётко соблюдать предписания врачей относительно времени забора анализа, поскольку при различных заболеваниях оно назначается через разные периоды после последнего приема пищи. Для подтверждения инсулинорезистентности анализ на проинсулин сдают после 8-12 часов голодания. При диагностике инсулиномы иногда приходится прибегать к контролируемому голоданию на протяжении 3 суток. В тех случаях, когда необходимо исключить дефицит проконвертазы, кровь на проинсулин и инсулин забирают в течение 30 минут после еды. Накануне сдачи анализа не следует проводить активные спортивные тренировки и принимать спиртные напитки. В течение часа до исследования нельзя курить и подвергаться психоэмоциональным перегрузкам.

Кровь в объёме 3-4 миллилитра собирают в пробирку с разделяющим гелем. Биоматериал с хилёзом или гемолизом не подходит для исследования. На пробирке отмечают ФИО пациента, дату, время и место забора образца. Кровь центрифугируют для отделения плазмы. При необходимости длительного хранения образца его замораживают при -20 градусах Цельсия. Наиболее распространенными методами определения проинсулина являются иммунохемилюминесцентный, радиоиммунный и иммуноферментный анализ.

Принцип иммуноферментного анализа основан на том, что к моноклональным антителам проинсулина человека, фиксированным на планшете с лунками, прибавляют по 0,1 мл калибровочных растворов с различной концентрацией проинсулина. Планшет с образцами инкубируют в течение получаса в постоянном режиме перемешивания. Затем свободные частицы трижды отмывают и удаляют. Далее к комплексу антитело-антиген добавляют 0,1 мл моноклональных антител к проинсулину, отмеченных энзимом. Образцы инкубируют ещё 60 минут. Затем к раствору добавляют 0,2 мл буфера, состоящего из тетраметилбензидина и перекиси водорода. Полученную смесь инкубируют ещё четверть часа в темном месте при 25 градусах Цельсия. С целью прекращения ферментативной реакции используют 0,1 мл стоп-раствора. Измерение степени интенсивности окрашивания осуществляют на специальном фотометре при длине волны 450 нм.

Нормальные значения

Нормальные значения проинсулина существенно отличаются в различных лабораториях, поскольку зависят от метода исследования и используемых реактивов. В бланке лабораторного исследования норму проинсулина необходимо найти в графе «Референсные значения». Этот показатель будет указывать на нормы, принятые в данной лаборатории. Единицей измерения является пмоль/л (пикомоль на литр). При использовании метода иммуноферментного анализа нормальные значения показателя находятся в диапазоне от 2 до 6 пмоль/л. При интерпретации результатов необходимо учитывать, что на концентрацию проинсулина влияет длительный приём эстрогенсодержащих средств, глюкокортикостероидов, сахаропонижающих лекарственных препаратов, особенно на основе сульфанилмочевины. Заболевания, протекающие с почечной или печёночной недостаточностью, а также сопровождающиеся повышенной функцией щитовидной железы, могут вести к увеличению содержания проинсулина.

Диагностическое значение анализа

Повышение уровня проинсулина отмечается при инсулинрезистентных состояниях (сахарном диабете 2 типа, метаболическом синдроме), а также в результате стимуляции синтеза прогормона препаратами сульфанилмочевины. В подобных случаях конверсия проинсулина в инсулин будет частичной по причине снижения каталитической активности протеиназ. Концентрация инсулина в крови при этом уменьшается, а неактивного несвязанного проинсулина увеличивается. При эффективной терапии инсулинорезистентности примерно через 3 месяца уровень проинсулина снижается.

Увеличение уровня прогормона определяется при атеросклерозе и ассоциированных с ним заболеваниях: ишемической болезни сердца, цереброваскулярной болезни, перемежающейся хромоте. Причина повышения проинсулина в таких случаях может быть связана с прямым влиянием проинсулина и инсулина на атерогенез. Оно заключается в ускорении разрастания мышечной ткани артерий и увеличении синтеза жиров в стенках сосудов. Повышенное содержание проинсулина в крови обнаруживается при опухоли поджелудочной железы – инсулиноме и некоторых других редких новообразованиях (например, соматотропиноме). Причиной повышения показателя является неконтролируемый синтез проинсулина опухолевой тканью.

В результате гибели бета-клеток поджелудочной железы уровень проинсулина в крови снижается при сахарном диабете 1 типа. Эта же причина понижения уровня проинсулина отслеживается в случаях частичного удаления поджелудочной железы.

Лечение отклонений от нормы

Для исключения ложной диагностики необходимо учитывать клиническую картину, а также анамнез болезни, в том числе наследственный. Интерпретировать результаты анализа, назначать дополнительные лабораторные и инструментальные обследования для подтверждения диагноза может только лечащий врач (терапевт, педиатр, эндокринолог, хирург, онколог). Исходя из полученных результатов, специалист назначает консервативное или хирургическое лечение.