Культивирование эмбрионов

Культивирование эмбрионов – процесс развития и наблюдения за оплодотворившимися яйцеклетками (зиготами) в искусственно созданных условиях вне женского организма. Культивирование эмбрионов продолжается 2-5 дней, после чего они переносятся в полость матки для дальнейшего развития. Отсчет времени культивирования эмбрионов ведется со следующих после пункции и инсеминации суток, поскольку с этого периода у большинства ооцитов отмечается появление первых признаков оплодотворения. Приоритетной тенденцией эмбриологии является пролонгированное культивирование эмбрионов до достижения ими на 5-ый день стадии бластоцисты, что дает большие шансы на их имплантацию.

Культивирование эмбрионов осуществляется в специальных СО2-инкубаторах – шкафах с постоянными параметрами температуры - 37 °C, содержания СО2 - 5-6 %, влажности - 99%. Эмбрионы размещаются в инкубаторах в промаркированной лабораторной посуде (чашках Петри, Нунка, планшетах и др.) на культуральной (питательной) среде. Питательная среда, которую современная гинекология использует для культивирования эмбрионов, обогащена основными физиологическими ионами калия, магния, натрия, хлора, кальция, аминокислотами, энергетическими субстратами (глюкозой, пируватом, лактатом), витаминами и сывороточными белками.

За период культивирования размер эмбриона практически не изменяется: в первые сутки он составляет 0,1 мм, на пятые сутки - около 0,2 мм. Однако в это время происходит многократное дробление его клеток (бластомеров): от 1 клетки в первый день до 40-200 клеток в пятый день культивирования.

Первую оценку эмбрионов проводят через 16-18 часов после инсеминации, повторную – еще через сутки. Оценка эмбрионов и их перенос на новую культуральную среду производится ежедневно. Качество эмбрионов оценивается по их микроскопической картине и скорости деления. Функционально и морфологически нормальные эмбрионы делятся сравнительно быстро и спустя двое суток после искусственного оплодотворения состоят из 2-4-х бластомеров приблизительно одинакового размера, имеющих прозрачную цитоплазму без признаков клеточной фрагментации.

При наличии риска наследования генетических или сцепленных с полом заболеваний на стадии культивирования эмбрионов, до их подсадки в полость матки, проводится предимплантационная генетическая диагностика. В этом случае проводится оценка хромосомного набора эмбриона, и для пересадки отбираются эмбрионы со здоровым генотипом или необходимым полом. Предимплантационная диагностика осуществляется путем FISH-анализа (флуоресцентной гибридизации), ПЦР-диагностики или биопсии 1-2-х бластомеров на стадии развития эмбриона в 6-8 клеток. Статистика встречаемости хромосомных отклонений у эмбрионов, оплодотворенных in vitro и естественным образом, одинакова.

Часть жизнеспособных эмбрионов может быть подвергнута криоконсервации – заморозке и хранению при сверхнизких температурах жидкого азота. При необходимости после разморозки эти эмбрионы могут использоваться для повторного переноса в матку.

В процессе культивирования эмбрионов часть из них может не развиваться или развиваться аномально – такие эмбрионы не подлежат переносу в полость матки. Определение сроков переноса эмбрионов производится после оценки их количественно-качественных характеристик.