Квантифероновый тест

Квантифероновый тест (интерфероновый тест, QuantiFERON-TB, ИФН-γ тест на туберкулез) – это метод определения в крови уровня γ-интерферона, вырабатываемого сенсибилизированными к микобактериям T-лимфоцитами. Анализ применяется как альтернатива пробе Манту для выявления скрытых или активных форм туберкулезной инфекции, в том числе для скрининга. Квантифероновый тест предполагает исследование венозной крови иммуноферментным методом. Стоимость рассчитывается, исходя из используемых реактивов, материалов, лабораторного оборудования, учитывает трудоемкость проведения анализа.

Показания

Квантифероновый тест назначается для рутинной и скрининговой диагностики различных форм туберкулеза – активного, латентного, легочного или внелегочного. Используется в качестве более современной, надежной и безопасной альтернативы традиционной пробе Манту. Проведение теста показано в следующих ситуациях:

• Отрицательные кожные пробы на фоне ослабленной реактивности: при иммунодефицитах (включая ВИЧ-инфекцию), алиментарном истощении, гемобластозах, онкопатологии.
• Наличие противопоказаний к туберкулинодиагностике: острых и хронических инфекций, кожных и аллергических заболеваний, индивидуальной непереносимости.
• Подтверждение сомнительных результатов кожных тестов.
• Ложноположительная реакция Манту после прививки БЦЖ: чтобы отличить поствакцинальные реакции и инфицированность у детей старше 5 лет.
• Затруднительное получение результатов туберкулиновых проб: у бездомных, потребителей наркотиков, страдающих алкоголизмом.
• Верификация инфицированности или активного туберкулеза: при положительных кожных пробах, рентгенологических изменениях, клинических признаках болезни – длительном кашле, кровохарканье, стойком субфебрилитете.
• Отбор пациентов на иммуносупрессивную терапию: перед назначением антицитокиновых препаратов.
• Обследование иммигрантов: повышенное внимание уделяется прибывшим их регионов с высокой заболеваемостью туберкулезом.

Квантифероновый тест считают «золотым стандартом» диагностики скрытого туберкулеза в группах риска. К ним относят пациентов с болезнями органов дыхания и другой соматической патологией (эндокринной, аутоиммунной, почечной), проходящих лучевую и химиотерапию. Повышенному риску инфицирования подвержены медицинские работники, отдельные категории населения: дети, подростки, пожилые, беременные, роженицы, лица, побывавшие в местах лишения свободы.

Подготовка к квантифероновому тесту

Исследование обычно назначается врачом общей практики, фтизиатром. Как биохимический анализ, квантифероновый тест предваряется несложной подготовкой со стороны пациента. Предотвратить искажение результатов позволяют следующие мероприятия:

• Обычный пищевой режим накануне. Соблюдение специальной диеты не требуется, но обычно рекомендуют обойтись без избыточного потребления животных жиров.
• Ночной голод. Материал на исследование берут строго натощак, чтобы после приема пищи прошло не менее 8 часов.
• Отказ от курения. Воздержаться от сигарет придется за 30 минут до взятия крови.

Если анализ проводится впервые в виде скрининга, других подготовительных мер не предусмотрено. Когда требуется исключить либо подтвердить активную инфекцию, квантифероновый тест может осуществляться после туберкулиновых проб, врачебного осмотра, рентгенографии грудной клетки и других исследований.

Методика проведения

Принцип квантиферонового теста основан на стимуляции выработки гамма-интерферона T-лимфоцитами, ранее сенсибилизированными к антигенам микобактерий, и его количественном определении иммуноферментным методом. Исследование проходит 2 этапа – преаналитический и аналитический. Первый предполагает следующие действия:

• Забор крови. Производится в три пробирки (с антигеном, митогеном, контрольную).
• Перемешивание. Пробирки переворачивают несколько раз в течение 5 секунд для смешивания крови с реагентами.
• Хранение, транспортировка. Осуществляются при температуре 20–24°C, от момента забора крови до начала исследования должно пройти не более 16 часов.
• Инкубация. Материал находится 16 часов в термостате при температуре 37°C.
• Центрифугирование. Для отделения плазмы от форменных элементов пробирки центрифугируют 5–15 минут.

После этого приступают непосредственно к анализу содержания интерферона методом ИФА. В лунки планшета сначала вносят плазму с конъюгатом, инкубируя на протяжении 3 часов при комнатной температуре. Затем проводят отмывку реагента с добавлением субстрата и стоп-раствора. Исследование завершается компьютерным анализом, интерпретацией результатов. Итоговое заключение по квантифероновому тесту делает только врач лабораторной диагностики.

Преимущества метода

Квантифероновый тест является высокоинформативным методом определения состояния клеточного иммунного ответа у людей, предположительно инфицированных или больных туберкулезом. Анализ выгодно отличается от кожных проб (Манту, Диаскинтеста), ранее считавшихся единственным методом обнаружения зараженности МБТ. Основными преимуществами квантиферонового теста являются:

• Высокие чувствительность (89%) и специфичность (99,2%). Достигается благодаря использованию рекомбинантных антигенов, отсутствующих у M.bovis и многих нетуберкулезных микобактерий.
• Малая вероятность ложных результатов. Анализ никак не реагирует на вакцину БЦЖ, для исключения ошибок при низкой активности лимфоцитов параллельно ставят пробу с неспецифическим митогеном.
• Безопасность, отсутствие побочных эффектов. Анализ проводится in vitro, поэтому не сопряжен с риском индивидуальной непереносимости, аллергических реакций, активации инфекции на фоне иммуносупрессии, а также у детей.
• Отсутствие противопоказаний. Исследование может проводиться всем лицам из группы риска, независимо от наличия сопутствующих состояний.
• Удобство, быстрота получения результата. Требуется одно посещение врача, тест проводится за 20–24 часа.
• Исключение субъективной оценки. Анализ и расшифровка осуществляются программно-аппаратным способом.

Метод широко внедряется в практическую фтизиатрию – включен в комплекс обязательного обследования в 78 странах, используется ведущими научно-исследовательскими центрами, диагностическими лабораториями. Проведение анализа одобрено международными и национальными клиническими рекомендациями.

Ограничения метода

Концентрация γ-ИФН не зависит от степени и стадии инфицирования, поэтому квантифероновый тест не позволяет дифференцировать активную фазу развития инфекции от латентной. Даже, несмотря на высокую чувствительность, отрицательный ответ не может полностью гарантировать отсутствие инфекции. Иногда вероятны ложноотрицательные результаты:

• Ранние сроки инфицирования.
• Иммунодефицитные состояния.
• У детей до 5 лет.

Ослабление ответа возможно на фоне иммуносупрессивной терапии. На получение сомнительных показателей влияют индивидуальные особенности иммунного ответа, нарушения, допущенные на преаналитическом этапе процедуры. Положительные результаты квантиферонового теста бывают при инфекциях, вызванных некоторыми нетуберкулезными микобактериями. Это требует повторного тестирования или проведения дополнительных исследований.

Учитывая указанные особенности, квантифероновый тест нельзя считать самодостаточным методом диагностики туберкулеза. Чтобы подтвердить или исключить наличие инфекции, необходимо комплексное обследование. Наряду с этим стоимость анализа все еще остается высокой, а необходимость венепункции может ограничить его проведение у детей раннего возраста.