ПИКСИ (PICSI)

ПИКСИ (PICSI) – методика селекции сперматозоидов с использованием специальных сред для последующего интрацитоплазматического введения в ооцит. Процедура применяется у пациентов с азооспермией, астенозооспермией, олигозооспермией, тератозооспермией, низким качеством размороженных спермиев, неудачными попытками ИКСИ в анамнезе. Данная технология позволяет отобрать морфологически полноценный сперматозоид не только под визуальным контролем (400-кратным увеличением), но и на основании его химико-биологических характеристик. В процессе ПИКСИ (PICSI) генетическая зрелость сперматозоидов определяется по их способности связываться с гиалуроновой кислотой. В дальнейшем именно эти морфологически зрелые мужские гаметы вводятся в цитоплазму яйцеклетки.

На протяжении последнего десятилетия в лечении мужского бесплодия достигнут значительный прогресс, связанный главным образом с созданием метода ИКСИ и позднее его модифицированного варианта - процедуры ИМСИ. Однако искусственный отбор сперматозоида по морфологическим и кинетическим критериям не позволяет определить степень зрелости гаметы и выявить дефекты ДНК ядра. Также зачастую возможности визуальной оценки достаточно субъективны, поскольку полностью зависят от опыта и квалификации эмбриолога. ПИКСИ - инновационная репродуктивная технология, основанная на физиологической селекции сперматозоидов с помощью гиалуроновой кислоты. Метод ПИКСИ был разработан в 2003 году в США профессором Г. Хусзаром, который использовал гиалуроновую кислоту в качестве «биологического индикатора» зрелости сперматозоидов, что позволило ему выделить жизнеспособные гаметы не только с нормальной морфологией и подвижностью, но и с неповрежденным генетическим материалом.

Гиалуронат является главным структурным компонентом внеклеточного матрикса ооцитарно- кумулюсного комплекса и в естественных условиях играет роль физиологического барьера, препятствующего проникновению в ооцит незрелого сперматозоида. Только зрелый сперматозоид, мембрана которого имеет специфические рецепторы связывания с гиалуроновой кислотой, способен достигнуть яйцеклетки и оплодотворить ее. ПИКСИ является эффективным дополнением процедуры ИКСИ и представляет собой процесс отбора отцовских гамет с наибольшим оплодотворяющим потенциалом путем выявления их способности связывания с гиалуронатом.

Показания и противопоказания

Процедура ПИКСИ в основном применяется для лечения мужского бесплодия, связанного с различными нарушениями сперматогенеза. Селекция сперматозоидов с помощью гиалуроновой кислоты рекомендована при наличии некоррегируемых отклонений основных показателей спермограммы, таких как снижение концентрации, подвижности и количества морфологически нормальных форм (олиго-, астено- и тератозооспермии). Показаниями к ПИКСИ также являются низкая частота оплодотворения и неудовлетворительное качество эмбрионов в предыдущих циклах ЭКО или ИКСИ. ПИКСИ является методом выбора для достижения беременности в случаях получения малого количества ооцитов или использования сперматозоидов, извлеченных из яичка или его придатка хирургическим путем. Данная репродуктивная технология также применяется для лечения длительного бесплодия неясного генеза.

Противопоказаниями для проведения процедуры ПИКСИ являются заболевания женщины, которые могут осложнить течение беременности, ухудшить состояние здоровья или представлять угрозу для жизни (тяжелые соматические болезни, злокачественные новообразования, генетическая патология). Использование ПИКСИ, также как и других программ ВРТ, недопустимо при наличии психических заболеваний в семье, препятствующих или существенно затрудняющих воспитание детей.

Подготовка к ПИКСИ

Обследование супружеской пары на подготовительном этапе включает стандартные для всех программ ЭКО лабораторные и инструментальные исследования. В рекомендованный объем предварительного обследования мужчины при планировании протокола ПИКСИ, кроме спермограммы, общелабораторных анализов и консультаций андролога и генетика, входит экспресс-тест HBA – анализ связываемости сперматозоидов с гиалуронатом в нативном эякуляте. Тест выполняется на специальном предметном стекле, поверхность которого покрыта тонким слоем гиалуроновой кислоты, и заключается в вычислении индекса связывания сперматозоидов путем оценки количества гиалуронат-связанных и несвязанных форм. Результат данного теста позволяет эмбриологу заранее отрегулировать объем и концентрацию сперматозоидов, необходимых для достижения оптимальной плотности связывания при проведении процедуры ПИКСИ.

Непосредственная подготовка к циклу ПИКСИ включает забор и обработку на лабораторном этапе мужских и женских половых гамет. В протоколе могут быть использованы собственные, полученные в день манипуляции, или криоконсервированные клетки, также допустимо применение донорского материала. При планировании цикла ПИКСИ, предполагающего стимуляцию суперовуляции с целью получения большого числа зрелых периовуляторных фолликулов, назначают индивидуальную схему введения препаратов-индукторов фолликулогенеза в яичниках. В процессе индуцированного цикла проводится гормональный и эхографический мониторинг роста фолликулов и эндометрия. После введения триггера овуляции выполняют трансвагинальную пункцию для изъятия ооцитов. Яйцеклетки могут быть криоконсервированы и после размораживания успешно использоваться в последующих, не индуцированных циклах ПИКСИ или других программах ЭКО.

Непосредственно перед проведением процедуры ПИКСИ ооциты очищают от клеток кумулюса с помощью фермента гиалуронидазы. Плотно прилегающие клетки лучистого венца удаляют кончиком пастеровской пипетки. После ферментативной и механической обработки ооцитов под микроскопом оценивают степень их зрелости и отбирают для оплодотворения in vitro только те гаметы, которые имеют полярное тело. Сбор эякулята осуществляется в стерильную пластмассовую емкость путем мастурбации после 3-5 дневного полового воздержания. Приготовление образца спермы для ПИКСИ проводится с помощью процедуры swim-up (метод центрифугирования-флотации).

Методика проведения

Основной принцип методики ПИКСИ заключается в отборе сперматозоида с лучшими морфологическими характеристиками и высокой оплодотворяющей способностью на основании биохимического взаимодействия специфических рецепторов на мембране клетки с гиалуронатом. Для проведения процедуры используют специальные культуральные чашки ПИКСИ, на внутренней поверхности которых нанесены три микрокапли гиалуроновой кислоты. С целью гидратирования (разбухания) гиалуроната поверхность каждой микрокапли покрывают средой и поверх заливают минеральным маслом для предотвращения высыхания. Приготовленную суспензию сперматозоидов при помощи микропипетки доставляют в первую микрокаплю и оставляют на время, необходимое для связывания с гиалуроновой кислотой (5-20 мин.).

Чашку ПИКСИ помещают на столик инвертированного микроскопа и при сильном оптическом увеличении (400-х кратном) оценивают плотность связывания сперматозоидов на микрокапле. При достаточной плотности связывания суспензию сперматозоидов добавляют в оставшиеся микрокапли, в случае необходимости исходный образец спермы концентрируют либо разбавляют для достижения оптимальной концентрации. Гиалуронат-связанные сперматозоиды лишены прогрессивной подвижности и легко идентифицируются по хвостам, совершающим частые активные колебания. Незрелые формы гамет, неспособные связываться с гиалуроновой кислотой в чашке ПИКСИ, продолжают активно двигаться. Селекцию сперматозоидов производят из центральной части каждой микрокапли путем их засасывания в микропипетку. Отобрав 20-50 полноценных мужских половых гамет, приступают непосредственно к процедуре ИКСИ.

Сперматозоиды, выделенные методом ПИКСИ, погружают в каплю с поливинилпирролидоном (ПВП) и повторно оценивают их подвижность и морфологическое строение. За счет повышенной вязкости ПВП движение сперматозоидов замедляется, что позволяет легко манипулировать с ними. Перед введением в цитоплазму яйцеклетки сперматозоид необходимо иммобилизировать, для чего среднюю часть хвоста блокируют микроиглой и несколькими движениями перетирают о дно чашки. Обездвиженный сперматозоид аспирируют в микроиглу путем создания отрицательного давления в инъекторе микроскопа и перемещают из чашки ПИКСИ в чашку Петри, на дне которой заранее формируют капли со средой и ооцитами. После ориентации в нужном положении и закрепления ооцита на микроприсоске осуществляют прокол оолеммы и инъекцию сперматозоида в ооплазму. По окончании манипуляций ПИКСИ+ИКСИ ооциты перемещают в культуральную среду и в условиях инкубатора культивируют на протяжении 3-5 дней.

Эффективность метода

Многочисленные клинические исследования, посвященные изучению физиологической селекции сперматозоидов с помощью гиалуроната, свидетельствуют о высокой эффективности метода ПИКСИ. Процедура ПИКСИ позволяет отобрать и использовать в цикле ИКСИ зрелый и функционально компетентный сперматозоид с интактной ДНК и нормальным ядром. Установлено, что 99% гиалуронат-связанных сперматозоидов обладают лучшей морфологией и целостным генетическим материалом, характеризуются отсутствием или крайне низким уровнем фрагментации ДНК и имеют существенное снижение частоты анеуплоидий.

Использование мужских гамет, выделенных методикой ПИКСИ, для искусственного оплодотворения значительно улучшает качество эмбрионов, увеличивает частоту имплантации и наступления беременности. Эффективность процедуры в достижении клинической беременности составляет 30-36%, при этом частота перинатальных потерь на ранних сроках (замершая беременность, самопроизвольный аборт) достаточно низкая - 17-20%. Существенное повышение эффективности оплодотворения наблюдается при одновременной селекции сперматозоидов техникой ПИКСИ и ИМСИ.

Стоимость ПИКСИ в Москве

ПИКСИ относится к высокотехнологичным и трудоемким репродуктивным технологиям. Для проведения данной процедуры требуется специальное микроманипуляционное оборудование, инвертированный микроскоп, оснащенный мощной оптической системой, а также индивидуальные культуральные чашки ПИКСИ. В Москве цена ПИКСИ практически соизмерима с ценой на процедуру ИКСИ. Окончательная цена на ПИКСИ определяется количеством оплодотворяемых данным методом яйцеклеток. Необходимо отметить, что выставляется цена только на саму технику лабораторных микроманипуляций без учета стоимости предварительного обследования и консультирования, индукции суперовуляции и трансвагинальной пункции фолликулов, теста HBA, эмбриотрансфера, криоконсервации гамет и эмбрионов и других необходимых составляющих программы ЭКО.